RESUMO
Introduction: The pandemic caused by SARS-CoV-2 has had a major impact on health systems. Vaccines have been shown to be effective in improving the clinical outcome of COVID-19, but they are not able to fully prevent infection and reinfection, especially that caused by new variants. Methods: Here, we tracked for 450 days the humoral immune response and reinfection in 52 healthcare workers from Brazil. Infection and reinfection were confirmed by RT-qPCR, while IgM and IgG antibody levels were monitored by rapid test. Results: Of the 52 participants, 19 (36%) got reinfected during the follow-up period, all presenting mild symptoms. For all participants, IgM levels dropped sharply, with over 47% of them becoming seronegative by the 60th day. For IgG, 90% of the participants became seropositive within the first 30 days of follow-up. IgG antibodies also dropped after this period reaching the lowest level on day 270 (68.5 ± 72.3, p<0.0001). Booster dose and reinfection increased the levels of both antibodies, with the interaction between them resulting in an increase in IgG levels of 130.3 arbitrary units. Conclusions: Overall, our data indicate that acquired humoral immunity declines over time and suggests that IgM and IgG antibody levels are not associated with the prevention of reinfection.
Assuntos
COVID-19 , Imunidade Humoral , Humanos , SARS-CoV-2 , Brasil/epidemiologia , Estudos Longitudinais , Reinfecção , Imunoglobulina G , Pessoal de Saúde , Imunoglobulina MRESUMO
BACKGROUND: COVID-19 has become a major public health problem after the outbreak caused by SARS-CoV-2 virus. Great efforts to contain COVID-19 transmission have been applied worldwide. In this context, accurate and fast diagnosis is essential. METHODS: In this prospective study, we evaluated the clinical performance of three different RNA-based molecular tests - RT-qPCR (Charité protocol), RT-qPCR (CDC (USA) protocol) and RT-LAMP - and one rapid test for detecting anti-SARS-CoV-2 IgM and IgG antibodies. RESULTS: Our results demonstrate that RT-qPCR using the CDC (USA) protocol is the most accurate diagnostic test among those evaluated, while oro-nasopharyngeal swabs are the most appropriate biological sample. RT-LAMP was the RNA-based molecular test with lowest sensitivity while the serological test presented the lowest sensitivity among all evaluated tests, indicating that the latter test is not a good predictor of disease in the first days after symptoms onset. Additionally, we observed higher viral load in individuals who reported more than 3 symptoms at the baseline. Nevertheless, viral load had not impacted the probability of testing positive for SARS-CoV-2. CONCLUSION: Our data indicates that RT-qPCR using the CDC (USA) protocol in oro-nasopharyngeal swabs samples should be the method of choice to diagnosis COVID-19.
Assuntos
COVID-19 , SARS-CoV-2 , Humanos , SARS-CoV-2/genética , COVID-19/diagnóstico , Teste para COVID-19 , Estudos Prospectivos , Brasil/epidemiologia , Técnicas de Laboratório Clínico/métodos , Pessoal de Saúde , RNA , Imunoglobulina G , Imunoglobulina M , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
BACKGROUND: Schistosoma mansoni is a trematode parasite that causes schistosomiasis, one of the most prevalent neglected tropical diseases, leading to the loss of 2.6 million disability-adjusted life years. Praziquantel is the only drug available, and new drugs are required. The most common strategy in schistosomiasis drug discovery is the use of the schistosomula larval-stage for a pre-screen in drug sensitivity assays. However, assessing schistosomula viability by microscopy has always been a limitation to the throughput of such assays. Hence, the development of validated, robust high-throughput in vitro assays for Schistosoma with simple readouts is needed. Here, we present a simple and affordable alternative to assess schistosomula viability. The method employed is based on the hydrosoluble tetrazolium salt XTT which has been widely used in other organisms but has never been used to drug screen in schistosomes. RESULTS: We showed that schistosomula reduce XTT salt to a coloured formazan product and that absorbance levels reflected the viability and parasites number. This XTT viability assay was validated for high throughput screening of compounds in schistosomula, and dose-response curves of compounds could be reproduced. CONCLUSIONS: We conclude that the XTT viability assay could be applied for the screening of large compounds collections in S. mansoni and accelerate the identification of novel antischistosomal compounds.
Assuntos
Colorimetria/métodos , Ensaios de Triagem em Larga Escala/métodos , Schistosoma mansoni/fisiologia , Sais de Tetrazólio , Animais , Biomphalaria , Relação Dose-Resposta a Droga , Indicadores e Reagentes , Concentração Inibidora 50 , Modelos Lineares , Testes de Sensibilidade Parasitária , Reprodutibilidade dos Testes , Schistosoma mansoni/efeitos dos fármacos , Schistosoma mansoni/isolamento & purificação , Esquistossomicidas/farmacologia , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
A esquistossomose é uma das mais importantes doenças parasitárias sendo endêmica em 76 países. No Brasil, esta representa um dos mais sérios problemas de saúde pública,persistindo devido às precárias condições de vida nas quais a população está inserida.O Schistosoma mansoni é a única espécie descrita no Brasil responsável por causar a esquistossomose. Este parasito é um metazoário digenético com várias características única sem sua morfologia, fisiologia e ciclo de vida. Diante disto, é provável uma complexa regulação da expressão gênica em S. mansoni favorecendo mudanças morfológicas e bioquímicas atendendo as suas necessidades fisiológicas e de adaptação aos diversos ambientes. Assim, o mecanismo de regulação pós-transcricional, Splicedleader (SL) trans-splicing, existente no parasito, pode ser importante para viabilizar tais adaptações. Este mecanismo é apenas parcialmente compreendido sendo um amplo campo para pesquisa, auxiliando no desenvolvimento de possíveis ferramentas para o controle da esquistossomose...
O SL trans-splicing ocorre através da adição de uma sequência identificada como Spliced leader, que é doada da extremidade 5 de um RNA pequeno, para alguns pré-mRNAs receptores, formando o éxon 5 terminal dos mRNAs maduros. Neste trabalho, foi realizado a identificação de transcritos processados por SL trans-splicing na fase de esporocisto do ciclo de vida do S. mansoni através da construção de biblioteca de cDNA enriquecida neste mecanismo. Assim, por meio de um estudo pioneiro de transcriptômica envolvendo a fase de esporocisto, foram construídas bibliotecas do tipo fragmento e utilizado um sequenciador de segunda geração para identificação de 1.191 transcritos processados por SL trans-splicing nesta fase. Neste trabalho foi observado que 10% dos transcritos expressos na fase de esporocisto são processados por SL trans-splicing se comparado à 5ª versão do proteoma predito de S. mansoni e 15%, se comparado com os 6.677 genes expressos identificados no transcriptoma da fase de esporocisto. Ainda, a partir da classificação dostranscritos em categorias funcionais e identificação de vias metabólicas, foi observado que o mecanismo de SL trans-splicing não está particularmente enriquecido, caracterizando-se como um mecanismo ubíquo. Em conjunto, estes dados enriquecem os estudos de transcriptômica do parasito S. mansoni. Compreender as reais funções deste mecanismo pode auxiliar no desenvolvimento futuro de uma ferramenta de intervenção terapêutica para o controle da esquistossomose mansônica...
Assuntos
Animais , Análise de Sequência de RNA/métodos , Esquistossomose/genética , Schistosoma mansoni/genéticaRESUMO
A esquistossomose é uma das mais importantes doenças parasitárias sendo endêmica em 76 países. No Brasil, esta representa um dos mais sérios problemas de saúde pública,persistindo devido às precárias condições de vida nas quais a população está inserida.O Schistosoma mansoni é a única espécie descrita no Brasil responsável por causar a esquistossomose. Este parasito é um metazoário digenético com várias características única sem sua morfologia, fisiologia e ciclo de vida. Diante disto, é provável uma complexa regulação da expressão gênica em S. mansoni favorecendo mudanças morfológicas e bioquímicas atendendo as suas necessidades fisiológicas e de adaptação aos diversos ambientes. Assim, o mecanismo de regulação pós-transcricional, Splicedleader (SL) trans-splicing, existente no parasito, pode ser importante para viabilizar tais adaptações. Este mecanismo é apenas parcialmente compreendido sendo um amplo campo para pesquisa, auxiliando no desenvolvimento de possíveis ferramentas para o controle da esquistossomose.
O SL trans-splicing ocorre através da adição de uma sequência identificada como Spliced leader, que é doada da extremidade 5 de um RNA pequeno, para alguns pré-mRNAs receptores, formando o éxon 5 terminal dos mRNAs maduros. Neste trabalho, foi realizado a identificação de transcritos processados por SL trans-splicing na fase de esporocisto do ciclo de vida do S. mansoni através da construção de biblioteca de cDNA enriquecida neste mecanismo. Assim, por meio de um estudo pioneiro de transcriptômica envolvendo a fase de esporocisto, foram construídas bibliotecas do tipo fragmento e utilizado um sequenciador de segunda geração para identificação de 1.191 transcritos processados por SL trans-splicing nesta fase. Neste trabalho foi observado que 10% dos transcritos expressos na fase de esporocisto são processados por SL trans-splicing se comparado à 5ª versão do proteoma predito de S. mansoni e 15%, se comparado com os 6.677 genes expressos identificados no transcriptoma da fase de esporocisto. Ainda, a partir da classificação dostranscritos em categorias funcionais e identificação de vias metabólicas, foi observado que o mecanismo de SL trans-splicing não está particularmente enriquecido, caracterizando-se como um mecanismo ubíquo. Em conjunto, estes dados enriquecem os estudos de transcriptômica do parasito S. mansoni. Compreender as reais funções deste mecanismo pode auxiliar no desenvolvimento futuro de uma ferramenta de intervenção terapêutica para o controle da esquistossomose mansônica.
